Cromatografía de afinidad – Qué es y cómo funciona

La cromatografía de afinidad se trata de un método de separación físico mediante el cual se mezclan bioquímicos que se basan en una interacción que sea altamente específica, como la que surge entre el antígeno y el anticuerpo, sustrato y enzima, o el ligando y el receptor. En este artículo te contaremos para qué se usa este tipo de cromatografía y cómo funciona.

¿Para qué se usa la cromatografía de afinidad?

Diversos son los usos y aplicaciones de la cromatografía por afinidad, entre estos, se pueden destacar los siguientes:

• Purificar y concentrar una sustancia partiendo de una mezcla.
• Disminuir la cantidad de una sustancia que hay en una mezcla.
• Discernir cuáles son los compuestos biológicos que se unen a una sustancia en particular.
• Purificar y concentrar una solución que sea de enzima.

¿Cómo funciona la cromatografía por afinidad?

Para explicar como funciona la cromatografía de afinidad, primero debemos aclarar que este proceso consiste en la separación física entre una mezcla y una sustancia que se encuentra en ella.

Dicha sustancia se encuentra disuelta en un medio fluido, denominado fase móvil, y las distintas sustancias que se desplazan por la mezcla, fase estacionaria. Cuando la fase móvil va avanzando a través de la fase estacionaria, la sustancia que se quiere separar se va asilando poco a poco.

Normalmente, la fase estacionaria de la cromatografía de afinidad consiste en un matriz de gel, normalmente de agarosa con la denominada resina de afinidad. En el laboratorio, dicho gel suele ser introducido en un tuvo vertical junto con la resina de afinidad, y se pasa la fase móvil a través de dichas sustancias.

Las otras moléculas que hay en la fase móvil no quedan atrapadas debido a que no tienen esta propiedad. La fase móvil se puede quitar de la mezcla, ya que se lavó y la molécula diaria se ha liberado de la planta mediante un proceso que se conoce como elución. La cromatografía de afinidad se usa comúnmente para purificar proteínas recombinantes.

La cromatografía de afinidad es la que suele ofrecer la mayor selectividad y especificidad para el aislamiento y la purificación de biomoléculas.

Cuando el compuesto retenido es eludido, los niveles de pureza que se obtienen en la cromatografía de afinidad son extraordinarios, debido a la elevada selectividad que tienen estas interacciones de afinidad.

De esta forma, se crea proteína que se denomina proteína de fusión, que tiene solamente la secuencia de oligonucleótidos que crean la proteína que además, cuenta con algunos residuos adicionales en los extremos Nterminal o C-terminal.

Esperamos que este artículo haya despejado tus dudas acerca de cómo funciona la de la cromatografía de afinidad que es una de las técnicas de cromatografía más útiles en el ámbito científico.

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