Cromatografía de exclusión por tamaño

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La Cromatografía de exclusión por tamaño, es un método con el cual las moléculas son separadas por su tamaño y en algunos casos por su peso molecular. Este método, a diferencia de otros modos de cromatografía, basa su funcionamiento en la ausencia de las interacciones de analito y en la fase empaquetada de la columna. ¿Quieres saber más acerca de este método? Descúbrelo con nosotros.

Este proceso es ideal para separar proteínas inalteradas de contaminantes, tales como excipientes, impurezas o restos celulares. Es por esta razón que la cromatografía de exclusión portamaño es utilizada en el desarrollo o en la fabricación de moléculas bioterapéuticas.

¿Cómo funciona la separación de moléculas?

Con este método, las moléculas son separadas por tamaño, es decir, se separan las más grandes de las más pequeñas, lo cual depende de su peso molecular en disolución. Para ser separadas, las moléculas más grandes quedarán excluidas del lecho empaquetado y por lo tanto eluyen en el volumen muerto, mientras que las pequeñas tendrán la oportunidad de penetrar los poros en diversos grados, pero siempre en función a su tamaño.

La cromatografía de exclusión por tamaño es usada para separar y cuantificar las proteínas, lo que quiere decir, que como técnica es adecuada para el control de calidad en la fabricación de proteínas recombinantes.

Este proceso es necesario que sea realizado con un sistema analítico moderno, porque de esta forma se pueden detectar mucho mejor las muestras. Con los detectores múltiples, es posible realizar una caracterización extensiva de las muestras de proteínas, obteniendo así, mediciones más exactas.

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¿Qué aplicaciones tiene la cromatografía de exclusión por tamaño?

Su aplicación principal es la de fraccionar las proteínas y demás polímeros solubles en agua. Si hablamos de las ventajas de este método, debemos decir que favorecen la separación adecuada de las moléculas grandes de las pequeñas, de manera que pueden aplicarse varias soluciones al mismo tiempo sin que esto mismo interfiera con el proceso de filtración.

La cromatografía de exclusión por tamaño, posee tiempos definidos y cortos, lo que quiere decir que realizan una separación eficaz y eficiente, pero al mismo tiempo conducen los resultados mediante un proceso de sensibilidad.

Aunque es importante destacar, que este proceso también tiene sus desventajas, las cuales son que solo se puede acomodar un número limitado de bandas y que en términos generales, debe existir una diferencia del 10% en la masa molecular para que pueda ser validada una buena resolución y un adecuado resultado.

¿Qué factores pueden afectar la filtración?

En sus características reales, las partículas en solución no cuentan con un tamaño fijo, lo cual resulta en que la partícula es obstaculizada por un poro desde el momento en el cual intenta pasar por él, ya que las partículas y los poros pueden variar de tamaño.

La solución más adecuada, es la de aumentar la longitud de la columna, ya que así aumentará el diámetro y la capacidad de la misma, logrando así que se pueda reducir el área de una superficie relativa a la fase estacionaria con especies más pequeñas, para que de esta forma queden atrapadas en los poros el menor tiempo posible.

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¿Cuáles son los mejores cromatógrafos para realizar una exclusión por tamaño?

En Net InterLab encontrarás cromatógrafos modernos y especializados capaces de detectar una gran variedad de sustancias sin importar la mezcla o los componentes.

Con un cromatógrafo de calidad, podrás obtener el estado más puro de las sustancias, lo que quiere decir que son ideales para identificar, separar y determinar los componentes deseados junto con sus cantidades exactas.

Lo realmente importante al momento de escoger un cromatógrafo, es que puedas conocer el funcionamiento de los equipos como tal, para que de esta forma puedas conseguir mejores resultados en tus análisis o investigaciones.

Es por esta razón, que nuestra principal recomendación es que puedas solicitar una asesoría personalizada y adecuada con profesionales dedicados a este fin. Si consideras que necesitas una asesoría personalizada, no te calientes la cabeza, simplemente contáctanos. En Net Inter Lab contamos con los mejores profesionales del sector.

La isolera Dalton, uno de los mejores cromatógrafos de laboratorio de nuestro catálogo

¿Cómo funcionan los equipos diseñados para la cromatografía de exclusión por tamaño?

Estos equipos se encuentran compuestos por lo siguiente:

  • Depósito de disolvente: El solvente es filtrado por medio de un filtro en línea, para luego ser desgasificado con un desgasificador conectado en serie.
  • Sistema de bombeo: El sistema de bombeo, es preciso y eficiente, el cual es capaz de trabajar a alta presión. En este punto, se suministra el disolvente a una velocidad constante y reproducible, para de esta manera poder convertir los tiempos de elución en volúmenes precisos y al mismo tiempo, calibrar la curva de elución.
  • Inyector: El inyector permite la inducción de las muestras, donde el más común es el inyector de bucle, el cual permite inyectar cantidades reproducibles a alta presión. Aunque, es importante tomar en cuenta que para las columnas convencionales, el volumen inyectado no puede exceder los 100 μL por columna.
  • Conjunto de columnas: Los componentes de los cromatógrafos se encuentran unidos por conexiones de volumen muerto y de tubos capilares, lo cual es necesario para minimizar el ensanchamiento de los picos. El rendimiento de las columnas puede ser mejorado aumentando la temperatura, pero esta misma reduce la presión de la columna.
  • Detectores en la salida de la columna: En cuanto a los detectores, existen dos grupos, tales como los que dan resultados proporcionales a la concentración del polímero que se dividen en refractómetros diferenciales, de absorción y de densidad, y los que dan resultados proporcionales a la masa molar media, tales como los viscosímetros, osmómetros y detectores de dispersión de luz.
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Pero es importante resaltar, que para obtener resultados adecuados y eficaces, se deben tomar en cuenta factores como las condiciones experimentales, dentro de los cuales podemos destacar la elección de la fase estacionaria y el eluyente, la temperatura, el volumen de inyección y la escogencia del flujo.

Según tus necesidades, podrás determinar el cromatógrafo adecuado en base al estudio deseado, de manera que en el catálogo de Net InterLab, tendrás a tu disposición desde equipos personales, hasta Isoleras Prime, de purificación, entre otros.

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