Existen muchas técnicas diferentes para la purificación de proteína, análisis químico de muestras biológicas o muestras de cualquier índole. A continuación, te explicamos lo que debes conocer sobre la preparación de muestras a la hora de realizar tu análisis químico posterior al muestreo de laboratorio.
Contenidos
Cuando hablamos de técnicas de preparación de muestras podemos encontrar entre las más comunes:
🔷 La extracción en fase sólida (SPE)
🔷 Extracción de líquidos con soporte (SLE)
🔷 Extracción líquida clásica (LLE)
🔷 PPE
La extracción de fase sólida es un método de preparación de muestras que concentra y purifica los analitos de la solución por sorción en un solvente contenido en un cartucho de fase sólida desechable o en una placa de 96 pocillos, seguido de la elución del analito con un disolvente y la reconstitución en una fase móvil.
En la extracción de líquido con soporte, las mismas fases acuosas utilizadas en la extracción clásica de líquidos se recubren sobre un soporte de tierra de diatomeas inerte, pero en lugar de agitar las dos fases inmiscibles juntas, la fase orgánica pasa a través de la columna y el cartucho, se realiza una extracción muy eficiente.
En la toma de muestras los compuestos se separan en la misma base de solubilidad diferencial, como en la extracción líquido-líquido convencional.
Cuando llevamos a cabo una toma de muestras en fase sólida debemos de proceder de la siguiente manera:
◾ Inicialmente se debe hacer un tratamiento previo de la muestra, dependiendo del compuesto de interés, la matriz de la muestra y la naturaleza de la química de retención. Esto implica ajuste de pH, centrifugación, filtración, dilución, adición de tampón, etc.
◾ Es necesario equilibrar esta fase. Se trata la adición de una solución similar a la matriz de la muestra para maximiza la retención, similar en polaridad, pH y otras características para poder cargar la muestra.
◾ Se procede a realizar los lavados para eliminar de forma selectiva las interferencias no deseadas extraídas conjuntamente con el analito sin eluir prematuramente los analitos de interés.
◾ A través de la elución es posible eliminar los analitos de interés con un solvente que supera las interacciones de retención primaria y secundaria, entre el absorbente y los analitos de interés. Y se reconstituye la fase móvil con reconstrucción de fase móvil.
Si bien la química de esta técnica es muy similar a la de extracción de líquido-líquido, la naturaleza física de este tipo de preparación de muestras ofrece distintos beneficios como:
✓ Alta capacidad de automatizar el proceso debido al uso de tubos de placa o columna de 96 pocillos.
✓ Mayor rentabilidad debido al bajo consumo de solvente.
✓ Alivio de las emulsiones que pueden formarse durante los protocolos tradicionales de extracción líquido-líquido.
✓ Recuperación y reproducibilidad mejoradas en comparación con extracción convencional líquido-líquido.
Dentro de los tipos de muestreo en química la extracción de líquidos con soporte (SLE) ha existido durante mucho tiempo, pero, sorprendentemente, rara vez se utiliza para reemplazar la extracción clásica de líquido-líquido (LLE).
Este procedimiento de preparación de muestras es una operación con muchas aplicaciones como toma de muestras biológicas para síntesis de ADN, extracción de matrices vegetales a nivel industrial y aplicaciones prácticas para el área de limpieza.
Uno de los mayores obstáculos en el análisis químico de una muestra biológica es la extracción del analito objetivo de matrices, a menudo llevadas a cabo por extracción líquido-líquido.
Sin embargo, con el avance científico tecnológico del área, han venido muchos tratamientos de muestras que requieren la extracción de sólidos y líquidos como una fase preliminar de la preparación de una muestra, por ejemplo, como ocurre en el análisis de contaminantes medio ambientales en plantas.
El funcionamiento de la extracción sólido-líquido debe garantizar que todos los analitos se recuperen completamente y que no se degraden de ninguna manera durante el proceso de extracción.
La extracción de sólido-líquido se puede realizar con disolventes fríos o calientes. Este es el primer paso.
La materia prima sólida se empaqueta en un contenedor con un retenedor en el fondo llamado extractor B2 y se extrae por lotes, el solvente es guiado a través del extractor de diferentes maneras.
🔷 Extracción continuada del lecho de goteo.
🔷 Extracción continuada por rebosamiento.
🔷 Extracción Soxhlet (contenedor periódicamente llenado y escurrido)
El uso de disolventes con una densidad más baja que la materia prima evita la flotación de materia orgánica que comprometa las condiciones del espacio. Muy a menudo, el disolvente se evapora, luego se condensa y se guía de nuevo en el extractor.
Los procesos posteriores al tratamiento implican realizar mejoras en la calidad de los productos sólidos o líquidos. En el caso del filtrado, estas operaciones se denominan procesos de pulido y pueden incluir micro o ultrafiltros para eliminar sustancias más finas.
Una purificación adicional puede implicar la eliminación de especies iónicas y macromoleculares mediante, por ejemplo, ósmosis inversa, intercambio iónico o electrodiálisis. La posición relativa de estos procesos de separación en el espectro del tamaño de la «partícula» que se eliminará del líquido.
La rápida y dinámica extracción de sólidos y líquidos es un ejemplo de tecnología innovadora para la extracción de sólidos y líquidos.
En comparación con otras técnicas de extracción actualmente en uso, permite una rápida finalización del proceso.
La innovación consiste en su nueva filosofía, es decir, los métodos actuales se centran en calentar el sistema extractor para aumentar el rendimiento y acortar los tiempos de extracción.
En Net-Interlab somos profesionales en preparación de muestras. Si tienes alguna duda sobre este tipo de técnicas de muestreo químico contacta con nosotros.
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